dc.identifier.uri |
http://dx.doi.org/10.15488/10093 |
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dc.identifier.uri |
https://www.repo.uni-hannover.de/handle/123456789/10156 |
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dc.contributor.author |
Yin, Sen
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ger |
dc.date.accessioned |
2020-10-15T08:26:49Z |
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dc.date.available |
2020-10-15T08:26:49Z |
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dc.date.issued |
2020 |
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dc.identifier.citation |
Yin, Sen: Biosynthesis of fungal alkyl citrates and polyketides. Hannover : Gottfried Wilhelm Leibniz Universität, Diss., 2020, x, 201 S. DOI: https://doi.org/10.15488/10093 |
ger |
dc.description.abstract |
Das Hauptaugenmerk der vorgestellten Arbeit lag auf dem Verständnis des Biosynthesewegs von Viridofungin, der Untersuchung der enzymatischen Eigenschaften der Schlüsselenzyme aus dem Byssochlaminsäure-Weg und der Entwicklung der PKS von Tenellin. In einer kombination aus genetischen und chemischen experimenten Ansatz wurden der Biosyntheseweg von Viridiofungin und die Funktionen von Enzymen aus dem Byssochlaminsäure-Weg sowie die Programmierung des Tenellin-PKS (TENS) -Systems aufgeklärt.
Das Trichoderma-virid MF5628 wurde zunächst durch Illumina- und Oxford-Nanoporen-Sequenzierung genomsequenziert. Es wurde unter Verwendung einer Kombination aus gezielter Gen-Knockout- und RNA-Interference-basierter Stummschaltung im nativen Organismus ein neuer, nicht veröffentlicht Biosyntheseweg identifiziert, an dem eine tRNA-Ligase beteiligt ist. Es wurde festgestellt, dass ein Citrat-Synthase-ähnliches Enzym und ein tRNA-Ligase-ähnliches Enzym für die Biosynthese von Viridiofungin essentiell sind.
Die Biosynthese von Byssochlaminsäure wurde durch Proteinexpression und in-vitro-Studie enukleiert. Eine Hydrolase, Citrat-Synthase, zwei 2-Methylcitrat-Dehydratase, zwei KSIs und zwei PEBPs-Proteine wurden in E. coli und Hefe exprimiert. Während der Maleinsäureanhydridmonomer Biosynthese kann eine Hydrolase die Hexaketidform vom ACP hydrolysieren. Die Citrat-Synthase kann Hexaketid-CoA und Oxalacetat als Substrat verwenden, um (2S, 3R) -Citrat zu bilden. 2-Methylcitrat-Dehydratase nimmt (2S, 3R) -Citrat-Diasteroisomer als Substrat, um ein 2, 3-Alken im Produkt zu bilden, und das Produkt kann ein spontan cyclisiertes Maleinsäureanhydridmonomer bilden. Zwei KSI verwenden schließlich Maleinsäureanhydrid-monomer, um das dimerisierte Produkt Byssochlaminsäure zu bilden. PEBP-Enzyme sind nicht der Katalyse der Dimerisierung beteiligt.
Basierend auf dem KR-Domain-Swap-Experiment mit TenS wurde die Kettenlängenprogrammierung in TenS aufgeklärt. Sechs KR-Domänen-Subfragmente, die mit den homologen Fragmenten der Hexaketid-Desmethylbassianin-Synthase (DMBS) und drei mit der Heptaketid-Militarinon-Synthase (MILS) ausgetauscht wurden, führten zur Synthese unterschiedlicher Kettenlängen von Polyketid-Produkten. Insbesondere der MILS KR-Domänenaustausch führte zur Synthese von Penta, Hexa und Heptaketiden. Die Ergebnisse dieser und vorherger Experimente in unserer Gruppe werden einbezogen, indem die Existenz einer Konkurrenz zwischen den CMeT- und KR-Domänen berücksichtigt wird. |
ger |
dc.language.iso |
eng |
ger |
dc.publisher |
Hannover : Institutionelles Repositorium der Leibniz Universität Hannover |
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dc.rights |
Es gilt deutsches Urheberrecht. Das Dokument darf zum eigenen Gebrauch kostenfrei genutzt, aber nicht im Internet bereitgestellt oder an Außenstehende weitergegeben werden. |
ger |
dc.subject |
byssochlamic acid |
eng |
dc.subject |
biosynthesis |
eng |
dc.subject |
domain swap |
eng |
dc.subject |
Viridiofungin |
ger |
dc.subject |
Biosynthese |
ger |
dc.subject |
PKS |
ger |
dc.subject.ddc |
540 | Chemie
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ger |
dc.title |
Biosynthesis of fungal alkyl citrates and polyketides |
eng |
dc.type |
DoctoralThesis |
ger |
dc.type |
Text |
ger |
dcterms.extent |
x, 201 S. |
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dc.description.version |
publishedVersion |
ger |
tib.accessRights |
frei zug�nglich |
ger |